Ec UDG酶說明書

UDG 酶可催化水解含有尿嘧啶的 DNA 鏈的尿嘧啶堿基和糖磷酸骨架的 N-糖苷鍵，釋放游離尿嘧啶。本尿嘧啶 DNA 糖基酶（UDG）來源于大腸桿菌 ung 基因，經(jīng)重組表達與多步蛋白純化而得。該酶分子量為 25KDa，催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈 DNA 釋放游離尿嘧啶，對 RNA 無活性。

UDG 酶常用于止 防止 PCR 擴增產(chǎn)物的交叉污染，其作用原理基于：在 PCR 反應(yīng)中以 dUTP 替代dTTP 摻入 DNA 中，形成了含 dU 堿基的 PCR 擴增產(chǎn)物，UDG 能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA中 U 堿基的糖苷鍵，降解 PCR 擴增產(chǎn)物，消除上輪擴增產(chǎn)物對新樣本的污染問題。由于大腸桿菌 UDG 經(jīng)高溫失活，降溫到低溫后，活性會部分恢復(fù)；因此不建議本酶用于 防止 PCR 擴增產(chǎn)物的交叉污染。建議利用本公司的熱敏 UDG（目錄號 AE0402）進行 防止 PCR 擴增產(chǎn)物的交叉污染。

主要應(yīng)用于 PCR 擴增產(chǎn)物的防污染。它的作用原理基于：在 PCR 反應(yīng)中以 dUTP 替代 dTTP摻入 DNA 中，形成了含 dU 堿基的 PCR 擴增產(chǎn)物，UDG 能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA 中 U堿基的糖苷鍵，降解 PCR 擴增產(chǎn)物，消除上輪擴增產(chǎn)物對新樣本的污染問題。

37℃反應(yīng)條件下，每分鐘催化 60 pmole 尿嘧啶堿基從含尿嘧啶的雙鏈 DNA 上釋放所需要的酶量為 1 U。

無內(nèi)切酶活性：50 U 的本酶和 1 μg 的 pBR322 DNA 在 37℃下反應(yīng) 2 小時，DNA 的電泳譜帶不發(fā)生變化。

干冰運輸。-20℃保存，有效期2年。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作！

本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

長期儲存 ( 非頻繁使用; 每月 1-2 次 ): -70℃；每天或每周使用: -20℃。盡量避免多次凍融，切勿暴露在溫度波動較大之處。溫度波動對產(chǎn)品的穩(wěn)定性有極大影響。

UDG 可以在 PCR 反應(yīng)前清除不慎污染的 U－DNA 分子，對于某個 PCR 擴增反應(yīng)，整個實驗室必須在所有的 PCR 反應(yīng)中添加 dUTP，使所有擴增產(chǎn)物都成為 U－DNA。如僅某次 PCR 擴增反應(yīng)使用 dUTP，T －DNA 仍積累，這個抗污染系統(tǒng)也難以起到wan全的作用。

UDG/dUTP 系統(tǒng)是 PCR 試劑專用的一種防污染措施，為了防止 PCR 產(chǎn)物的污染，尤其是在臨檢實驗室中反復(fù)擴增同一片段時，必須嚴(yán)格規(guī)范實驗室的區(qū)域劃分和操作。

如果經(jīng)過換房間、紫外照射、DNase 消化等措施后，依然對某個片段存在污染，建議在不同的擴增區(qū)重新設(shè)計引物，以錯開污染片段。

大腸桿菌 UDG 酶的反應(yīng)溫度可以在 37℃－50℃ 的范圍內(nèi)變化，建議在 37 度反應(yīng)，也可根據(jù)實驗需要在 37-50 ℃范圍內(nèi)自由調(diào)整反應(yīng)溫度。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。