線性聚乙烯亞胺PEI MW40000

基本信息CAS

49553-93-7

分子式

(C2H5N)n . xHCl

分子量

40,000 (~22,000 free base)

熔點

73-75℃

溶解性

溶于冷水

不溶于

常用有機溶劑（乙醇、丙酮、四氫呋喃）

形式

白色固體粉末

生物毒性

未知

安全防護

手套，護目鏡，口罩

存儲

粉末至少可以保存一年， PEI內含自由氨基，建議開封后4℃干燥保存，減緩氧化過程。

運輸

常溫運輸

特點

大量實驗數據反饋，細胞通用性好，有非常好的轉染效果，尤其對293，CHO細胞系有特別顯著的轉染效果。

配置方法

轉染操作流程：(貼壁細胞轉染方法)

1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化細胞并計數。將細胞鋪入細胞培養的器皿，每個孔加入的細胞量參考下圖表1，一般18-24小時（sf9細胞為3-4小時）后轉染。轉染時細胞匯合度應至少達到 70~80%以上。轉染前更換為含5%血清的生長培養基。

2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。 （稀釋PEI和DNA的體積為培養體積的1/10-1/20, DNA濃度為1ug/ml）

3. 轉染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。轉染4-6小時（sf9細胞為2小時 )后，更換為生長培養基。

4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

5. 轉染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。

轉染操作流程：(懸浮細胞轉染方法)

1. 轉染前準備：懸浮細胞傳代接種于適量含懸浮細胞生長培養基中，合適條件下培養。根據培養瓶大小調整細胞密度（例100mL培養瓶，1X10 ⁶ cells/mL），然后旋緊瓶口放入搖床繼續培養，2~4小時后可以進行轉染。

2. 準備 DNA-PEI 復合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉染細胞：將PEI-DNA轉染復合物逐滴加入到細胞培養液中，搖勻后旋緊瓶口放回搖床合適培養條件下培養至可以分析檢測。

4. 孵育細胞和分析結果：轉染后一般24-72h即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

5. 如果要獲得更多的蛋白產量，有文獻表明轉染后24小時，可以適當稀釋細胞，稀釋比例參考范圍（1:2—1:5）之間，可以增加蛋白產量，稀釋效應與最佳稀釋比率應根據經驗確定。

產品背景

        BIOHUB 生產的78Bio PEI是一種優化的線性陽離子聚合物轉染試劑,分子量分別為 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達系統中，相比于市面上的脂質體 78BioPEI 都表現出高的蛋白表達量（無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應器），以及更小的細胞毒性、更高的轉染效和更高的可 重復性，并且十分經濟的高性價比轉染試劑。產品具有以下特點：

1.轉染效率高，細胞毒性低；  蛋白表達量高；

2.節約成本：BIOHUB 78 PEI轉染試劑 ，進口品質，親民價格，至少能夠降 40% 的轉染試劑總成本；

3.適用于 HEK293 等真核細胞的轉染；

4.適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉染；

5.適用于有血清和無血清的轉染條件；

6. 無機試劑，無動物源成分；

7. 產品穩定，質控嚴格；

8. 工藝流程適用范圍廣，容易優化 適合小規模培養板，培養瓶到大規模的生物反應器。

產品反饋

注意事項

  1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

  2. 本產品主要用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

  3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當然酸可能不用加那么多，詳細用量可試加一點 ,攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。 

  4.一定要溶解充分，溶解不充分會影響后續的轉染效率.

  5.冷凍后可能會影響其后續轉染效果。