DMEM高糖培養基使用避坑指南

　　DMEM高糖培養基作為哺乳動物細胞培養的常用基礎培養基，廣泛應用于細胞增殖、分化及生物制品研發等場景。其使用過程中，易因儲存不當、操作不規范、污染防控疏漏等問題導致培養基失效、細胞生長異常，影響實驗結果可靠性。本文梳理使用全流程中的常見“坑”及規避技巧，為精準使用提供技術指引。

　　避坑一：儲存運輸不當導致營養成分降解。DMEM高糖培養基含氨基酸、維生素等熱敏性成分，高溫或反復凍融易導致成分流失。需嚴格遵循儲存要求：未開封干粉培養基密封存放于2-8℃干燥環境，避免潮濕、陽光直射；配制后的液體培養基需分裝為單次使用量，-20℃冷凍保存，禁止反復凍融（建議分裝體積≤50ml）。運輸過程中需用冰袋或干冰保溫，避免溫度波動超過±5℃，接收后及時檢查外觀，若出現渾濁、沉淀則禁止使用。

　　避坑二：配制操作不規范引發污染或滲透壓異常。配制是關鍵環節，需嚴格無菌操作與參數控制。首先確保配制環境無菌，在超凈工作臺內進行，實驗器具需經高壓滅菌（121℃、20min）并干燥。按說明書精準稱量干粉，加入適量無熱源超純水，磁力攪拌至全溶解（避免劇烈攪拌產生氣泡），隨后補加超純水至最終體積。關鍵一步是調節pH值，用5%NaHCO?溶液緩慢調節至7.2-7.4，過度調節易導致滲透壓失衡；配制完成后需經0.22μm濾膜過濾除菌，過濾后及時分裝，避免長時間暴露于空氣中。

　　避坑三：忽略添加劑適配性導致細胞生長受阻。DMEM高糖培養基為基礎培養基，需根據細胞類型添加適配添加劑，避免盲目添加。常規需添加10%-20%胎牛血清（FBS），血清需選擇合格批次并滅活（56℃、30min），未滅活血清易引入補體、病毒等有害物質；針對特殊細胞，需補充特定生長因子（如EGF、胰島素），添加濃度需通過預實驗確定，過量添加易導致細胞異常增殖或分化。此外，抗生素添加需謹慎，長期高濃度使用會導致細胞耐藥性，僅在污染風險較高時短期使用（如青霉素-鏈霉素混合液終濃度100U/ml）。
 

　　避坑四：使用過程污染防控疏漏。污染是細胞培養的致命問題，需從多環節規避。使用前檢查培養基外觀，液體培養基出現渾濁、絮狀物、顏色異常（如變黃過快）則為污染跡象，立即丟棄。細胞培養過程中，培養基更換周期需合理（常規2-3天更換一次），避免營養耗盡或代謝廢物積累；操作時避免培養基瓶口長時間敞開，瓶口接觸污染物后需及時更換瓶蓋。若發現輕微污染，禁止隨意添加抗生素挽救，應立即丟棄污染細胞與培養基，消毒培養環境，防止污染擴散。

　　避坑五：忽視特殊實驗需求導致結果偏差。不同實驗對培養基有特定要求，需針對性適配。例如進行糖代謝相關實驗時，需確認培養基葡萄糖濃度（高糖DMEM通常含4500mg/L葡萄糖），避免與低糖DMEM混淆；培養干細胞等敏感細胞時，需選用無血清、無酚紅的DMEM高糖培養基，減少血清成分干擾與酚紅對實驗檢測的影響。此外，培養過程中需監測培養基pH值變化，若pH值快速下降（顏色變橙黃），可能是細胞密度過高或培養環境CO?濃度異常，需及時調整。

　　DMEM高糖培養基使用需嚴格把控儲存、配制、添加劑適配、污染防控及實驗適配五大環節，規避常見誤區。規范的操作不僅能保障培養基效能，更能提升細胞培養成功率與實驗結果可靠性，為后續研究奠定堅實基礎。