慢病毒滴度快速檢測卡 說明書

  本產(chǎn)品是采用膠體金免疫層析技術(shù)快速檢測分泌到慢病毒包裝上清中的游離囊蛋白P24，以此作為一個(gè)靈敏的、間接的替代指標(biāo)來顯示病毒產(chǎn)量的檢測卡，通過對(duì)囊蛋白 P24 的檢測，能快速確定包裝液中的慢病毒滴度是否已經(jīng)達(dá)到收獲需要。該方法僅需要 5~10min 即可得到結(jié)果，與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法需要花費(fèi)2-3天相比，具有明顯優(yōu)勢。

產(chǎn)品性質(zhì)

關(guān)于慢病毒滴度

一個(gè)慢病毒顆粒（Lentiviral Particle, LP）中約有 2000 個(gè) P24 蛋白分子，用以下公式可以計(jì)算慢病毒載體的顆粒數(shù)（LP）：

一個(gè) LP 相當(dāng)于：2000×24×10^3/(6×10^23)g of P24=8×10^-5 pg of P24；或者說，1ng P24=1.25×10^7 LPs（≈1.25×10^4-5 TU**）

正常情況下，每 100-1000 LPs 中會(huì)有 1 個(gè)具有感染活性的病毒載體，即 1 TU（Transducing Unit）。

注意：上述公式計(jì)算得到的 LP 值是理論值，檢測樣品中含有的游離的 P24 蛋白可能會(huì)使該值偏高。

提示：通常上清中病毒含量需要超過 10^6 TU/ml，才能確保濃縮純化后得到足夠濃度的慢病毒載體（一般能濃縮 150 倍左右）。

本法給出的是檢測線（T 線）強(qiáng)度與功能滴度（Infectious Unit/mL, IFU/mL 或 Transduction Unit/mL, TU/mL）而非物理滴度（Viral Particle/mL, VP/mL）的相關(guān)性。這一相關(guān)性與病毒所轉(zhuǎn)染的細(xì)胞有關(guān)。例如，上圖中，用 3 倍連續(xù)稀釋的包裝上清轉(zhuǎn)染 HEK293 細(xì)胞。72 小時(shí)后，在熒光顯微鏡下觀察表達(dá) ZsGreen1 的細(xì)胞，并用流式細(xì)胞儀測定HEK293 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率，得到功能滴100µL 滴度為 2 10 6 IFU/ml 的包裝上清加到樣品孔中，10 分鐘后顯深紅色“T 線"。